2018-犬新孢子虫外泌体非标记定量蛋白质组学研究-吉林大学-Frontiers in Immunology（IF:5.51）

犬新孢子虫是专性的细胞内寄生虫，在牛业中造成重大的经济损失。但是，寄生虫-宿主相互作用的免疫机制尚未完全了解。外泌体（EVs）已作为一种普遍存在的机制出现，几乎所有细胞，尤其是免疫细胞和肿瘤细胞，都参与细胞间通讯。尽管研究表明弓形虫或布鲁氏锥虫分泌的外泌体促进了对宿主-寄生虫相互作用至关重要的生物分子的交换，但是，外泌体及其在犬新孢子虫中的生物学活性尚不清楚。在这里，我们使用多种方法（包括电子显微镜，纳米颗粒跟踪分析，RT-PCR，免疫荧光，蛋白质印迹，蛋白质组学和细胞因子分析）来检查犬新孢子虫外泌体的特性。我们发现犬新孢子虫产生的外泌体类似于哺乳动物的外泌体，通常直径在30至150nm之间。结果表明，犬新孢子虫外泌体可通过野生型（WT）小鼠骨髓显著增加促炎细胞因子IL-12p40，TNF-α，IL-1β，IL-6和IFN-γ的产生巨噬细胞（BMDM），而在TLR2-/-小鼠BMDM中IL-12p40，TNF-α和IFN-γ的分泌被强烈下调。 IL-6的水平不受影响，但IL-10的分泌上调。研究发现，与野生型小鼠BMDM中的TLR2-/-细胞相比，TLR2-/-细胞中P38，ERK和JNK的磷酸化水平显着降低，并且用P38，ERK和JNK的化学抑制剂处理导致IL-6上调，IL-12p40和IL-10生产。综上所述，犬新孢子虫外泌体可以快速内在化以将蛋白递送至宿主细胞，并以TLR2依赖性方式通过MAPK信号通路调节宿主细胞的免疫应答。本研究首次揭示了犬新孢子虫外泌体在寄生虫-宿主相互作用中宿主交流和免疫应答中的潜在作用。