CoIP-MS互作蛋白

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白间相互作用的经典方法,属于免疫沉淀技术的一类,常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。免疫共沉淀的设计理念是,假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员,那么利用这种蛋白的特异性抗体,就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉”下来(常说的“pull-down”),进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员。免疫共沉淀的特点可以概括为两点,第一是天然状态,第二是蛋白复合物。

技术原理 应用方向 实验流程 样本要求 实验设计 报告形式

免疫沉淀技术(Co-interacting Protein Identification Technology ,CoPIT)是以抗体与抗原间的专一性为基础用于研究蛋白质相互作用的经典方法,也是确定两种蛋白质在细胞内相互性生理作用的有效方法。表现为可溶性抗原与相应抗体在液相或凝胶中特异性结合后,形成的免疫复合物在一定条件下出现蛋白质析出。免疫沉淀与凝集反应、中和反应、补体参与的抗原抗体反应并称经典免疫学技术。随着对蛋白质研究的不断深入,人们将免疫沉淀方法与其他方法相结合,在其基础上衍生出很多更为复杂的技术,使蛋白质分析方法更为多样化,应用范围更为广泛。该技术现已广泛应用于基因、蛋白质以及其相互作用等研究领域。

 

参考文献:

1. Pankow, S., et al. "Characterization of membrane protein interactomes by Co-interacting Protein Identification Technology (CoPIT)." Protocol Exchange (2015).
2.Lee, Hong-Won, et al. "Real-time single-molecule coimmunoprecipitation of weak protein-protein interactions." Nature protocols 8.10 (2013): 2045.
3.Sousa, Mirta ML, et al. "Antibody cross-linking and target elution protocols used for immunoprecipitation significantly modulate signal-to noise ratio in downstream 2D-PAGE analysis." Proteome science 9.1 (2011): 45.
4. Free, R. Benjamin, Lisa A. Hazelwood, and David R. Sibley. "Identifying novel protein‐protein interactions using co‐immunoprecipitation and mass spectroscopy." Current protocols in neuroscience (2009): 5-28.

 

样品说明:
1.目标蛋白的详细信息(名称,序列,登录号等)。
2.如果已经有了目标蛋白的表达载体,请一并提供载体的相关信息。
3.需要提供目标蛋白对应的IP级抗体,或者我们可以提供代购服务。
4.潜在验证候选蛋白的WB验证可以IP实验之后进行,需要提供候选蛋白的WB级抗体。

抗体说明:
1. 推荐使用单克隆抗体进行CoIP实验,这样更有利于得到清晰并且低背景的实验结果。多克隆抗体也可实验,但需在实验过程中设置空白样本最为对照以排除非特异性吸附蛋白质条带。
2. 抗体需求量一般为10g左右。
3. 如果目标蛋白带有融合标签(Myc,Flag等),那么可以选用商业化对应的标签蛋白抗体进行CoIP实验。但是分子量较大的标签(比如RFP)可能会影响到蛋白质之间的互作关系,所以应避免使用分子量较大的标签进行IP实验。

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