LabelFree非标定量

非标记定量(Label free) 蛋白质组学技术
Label-free quantitative proteomics(Label free)technology

蛋白质非标记定量技术(Label-free)是通过多维液质联用技术(Multidimensional Protein Identification,MudPIT)对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,不需使用费用较贵的稳定同位素标签(iTRAQ,TMT等)做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。

 

技术原理 实验流程 技术特点 样品要求 案例展示 参考文献

按照定量策略,非标记定量方法可以分为两种:
1.Spectrum counts的定量方法:发展比较早,已经形成多种定量算法,但主要原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。
2.另一种非标记定量方法的原理是以MS1为基础,计算每个肽段的信号强度在LC-MS色谱上的积分。MaxQuant是目前为止的蛋白质组学非标定量标准算法,现在已成为蛋白质组学领域内的非标定量计算的主流方案。

 

优势:
1.非常适合于组间蛋白质表达谱差异的分析(如不同发育组织,不同细胞系等)
2.“有无”差异蛋白的筛选
3.宏蛋白质组学应用
4.蛋白质绝对水平分析
5.与HPLC分级偶联,提高低丰度蛋白检出率
6.高重复性和覆盖率

缺点:
1. 测试样本数量不宜过多
2. 对仪器依赖程度较高

 

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